HPTLC: Vysokoúčinná tenkovrstvá chromatografie

HPTLC (High-performance thin-layer chromatography) je vylepšením metody tenkovrstvé chromatografie (TLC). HPTLC přináší hlavně následující výhody:

velmi rychlá analýza,
nízké objemy aplikovaných vzorků,
nulová limitace rozpouštědly (UV cutoff, atp.),
paralelní analýza vzorků se standardy za identických podmínek,
eliminace přenosu kontaminace (carry-over) mezi jednotlivými vzorky,
vizuálnost a snadná dokumentovatelnost,
cenová výhodnost.

Jedná se tak o metodu:

jednodušší (snáze se provádí a vyhodnocuje),
rychlejší (méně času při nanášení vzorků, více vzorků paralelně),
levnější (v důsledku nižších provozních nákladů a paralelizace).

Díky těmto výhodám je HPTLC ideální metoda, například pro analýzu složitých směsí (extrakty přírodních látek, lipidy, vzorky s vysokým obsahem cukrů, atp.)

Postup při HTPLC

Zjistěte, jak aplikovat metodu HPTLC a jaké přístroje k tomu použít.

HPTLC postup

Kodifikace HPTLC

Ověřte si kodifikaci metody HPTLC státními autoritami.

Kodifikace HPTLC

Případová studie

Podívejte se, jak metoda HPTLC pomohla přesně stanovit obsah THC v konopí.

Případová studie

HPTLC vs TLC

Koncept HPTLC

HTPLC formát desek a typ stacionární fáze (desky 20x10, stacionární fáze s vysokou selektivitou),

vhodná instrumentace pro všechny kroky analýzy (včetně software),

standardizované a validované metody.

Rozdíly mezi HPTLC a TLC deskou

	HPTLC	TLC
Střední velikost částic	5 - 7 µm	10 - 15 µm
Distribuce velikosti částic	nízká	vysoká
Tloušťka tenké vrstvy	100, nebo 200 µm	250 µm
Maximální počet vzroků na jednu desku	36 - 72	12
Vzdálenost migrace látek	30 - 70 mm	100 - 150 mm
Doba vyvíjení desek	3 - 20 min	30 - 200 min
Množství použitých rozpouštědel	5 - 10 ml	50 ml
Limit detekce	Absorbance: 10 - 100 ng Fluorescence: 0,1 - 10 ng	Absorbance: 100 - 1000 ng Fluorescence: 1 - 100 ng

HPTLC

TLC

Střední velikost částic

5 - 7 µm

10 - 15 µm

Distribuce velikosti částic

nízká

vysoká

Tloušťka tenké vrstvy

100, nebo 200 µm

250 µm

Maximální počet vzroků na jednu desku

36 - 72

Vzdálenost migrace látek

30 - 70 mm

100 - 150 mm

Doba vyvíjení desek

3 - 20 min

30 - 200 min

Množství použitých rozpouštědel

5 - 10 ml

50 ml

Limit detekce

Absorbance: 10 - 100 ng Fluorescence: 0,1 - 10 ng

Absorbance: 100 - 1000 ng Fluorescence: 1 - 100 ng

Příklad: Separace flavonoidů

Rozdíly mezi HPTLC a TLC deskou lze lehce ukázat na příkladu separace flavonoidů (Ph.Eur.4). V obou případech byla použita stejná metoda nanášení vzorků!

HPTLC deska: